果膠酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2635
規(guī)格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑一：將試劑一A倒入試劑一B于50℃水浴中溶解（期間可拿出振蕩數(shù)次）。該試劑易長菌，配制完成后可-20℃分裝保存，可保存12周。
標準品：10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943mL蒸餾水，配成50μmol/mL的標準液。
產品說明：
果膠酶（pectinase）是分解果膠的酶類，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于高等植物果實和微生物中，是水果加工中最重要的酶。
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸與DNS試劑反應生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質，測定540nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. A大于1.5時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。

2. 植物果實組織建議將樣本用提取液稀釋10倍或20倍后再測定。

實驗實例：

1. 取0.1g蘋果加入1mL提取液進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清稀釋10倍之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA= A測定管-A對照管=1.466-1.357=0.109，帶入標準曲線y=0.1428x-0.1022，計算X=1.479μmol/mL，按樣本質量計算酶活得：

果膠酶活性（U/g質量）=2x÷W×10（稀釋倍數(shù)）=295.8 U/g質量。
相關發(fā)表文獻：

1. Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138.(IF2.581)

2. Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Two members of the velvet family,VmVeA and VmVelB,affect conidiation,virulence and pectinase expression in Valsa mali. Molecular Plant Pathology. November 2017;(IF4.379)

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